校正染料(ROX)在生物医学实验中扮演着重要角色，它能够有效校正样品添加误差以及孔与孔之间的差异，提供一个稳定的基线。这一特性显著提升了定量分析的精确度，并改善了重复实验的数据重现性。需要注意的是，不同的实验仪器可能对ROX的需求有差异。

在基线PCR的初始循环中，荧光信号几乎没有变化，阈值能够被认为是可信的最小荧光值。CT值指的是扩增曲线与阈值交点的横坐标。

结果有效性判断

在分析结果时，需要关注融解曲线是否单峰（染料法），扩增曲线的指数扩增区域，以及复孔间CT值标准差是否小于0.2。合理的阈值应位于指数增长期，尽管仪器通常会自动进行阈值计算，但在某些情况下可能需要手动调整以确保准确。

通过NTC（无模板对照）可以确认实验中无气溶胶污染。若ΔCT=NTC(CT值) - 目的基因(CT值) ≥ 3或≥ 5，则说明气溶胶污染不会影响实验结果的准确性。另一方面，通过NRT（无逆转录对照）可以验证体系中是否存在基因组残留，如果ΔCT=NRT(CT值) - 目的基因(CT值) ≥ 3或≥ 5，则表示基因组残留不会干扰实验结果的可靠性。

待测CT值需处于线性范围内，并且扩增效率应符合标准，即PCR扩增效率(e)应在90%-120%之间。

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