病毒载体因其在高效递送CRISPR组分方面的优势，已成为基因治疗研究中的重要工具，尤其是在转染较为困难的分化细胞中表现突出。然而，不同病毒类型虽然能实现高效的体内递送，其生产工艺的复杂性和较高的成本却限制了其广泛应用。与质粒相比，病毒载体的生产过程需要额外步骤：首先将CRISPR组分克隆至转移载体，然后再进行病毒颗粒的包装。这种劳动密集型的生产特性增加了大规模生产的难度。目前，主流的CRISPR递送载体包括慢病毒、腺相关病毒（AAV）和腺病毒，它们在转导效率、免疫原性、载体容量等方面各有优缺点，选择适合的载体需根据实验目的而定。

基于慢病毒的递送方式

慢病毒因其良好的基因递送效率，尤其是在CRISPR组分的递送中，被广泛使用，适合大规模的CRISPR文库筛选。其最大的优势在于转基因能够整合至宿主基因组，从而实现长期表达，对过表达实验尤为重要。然而，基因组整合所带来的插入突变风险，限制了其临床体内应用，现在主要用于基础研究和体外基因修饰，例如FDA已批准的CAR-T癌症疗法和Zynteglo用于治疗β-地中海贫血症。需要注意的是，慢病毒在递送CRISPR时，Cas9的持续表达可能会引发脱靶效应，利用可诱导表达系统或整合酶缺陷型慢病毒（IDLV）可有效缓解这一问题——IDLV的基因组整合率降低了约500倍。尽管其转导效率低于常规慢病毒，但在体外及体内神经元中的递送效果与常规载体相当，为中枢神经系统疾病的治疗提供了独特的潜力。

基于AAV的递送方式

基于腺相关病毒（AAV）的递送系统目前面临两大技术瓶颈：其一是载体容量限制（约42kb），远低于慢病毒载体的装载能力；其二是转导效率相对较低。针对容量问题，研究者提出了多种解决方案，包括使用序列较短的SaCas9、双载体共递送策略（分别装载Cas9与gRNA）、以及SpCas9的分割表达技术，通过两个载体递送SpCas9片段在细胞内合成完整的SpCas功能蛋白。值得关注的是，AAV系统具有独特的临床优势，多样化的血清型选择可实现组织特异性靶向，结合衣壳定向进化技术（通过体外/体内筛选优化衣壳蛋白），能进一步提升递送的精准性和治疗效果。目前尚无基于AAV的CRISPR疗法获得FDA批准，但AAV平台已成功应用于其他基因药物，如治疗脊髓性肌萎缩的Zolgensma®，其商业化应用为CRISPR-AAV疗法的临床转化提供了重要参考。

基于腺病毒的递送方式

腺病毒基于其非整合特性而展现出优秀的安全性，已通过多项临床试验证明，因此成为慢病毒的重要替代选择。与AAV和慢病毒载体相比，腺病毒具有显著的扩增装载能力，但高免疫原性可能会干扰基因编辑效果。目前，临床应用最广泛的Ad5血清型依赖CAR受体介导细胞转导，限制了其适用的组织范围。最新研发的Ad5/F35嵌合体成功突破了CAR受体的依赖性，同时gutless腺病毒载体（仅保留必要的包装序列）不仅降低了免疫原性，还提升了载体容量（可达33kb），特别适合表达长的或多个转基因。在临床转化方面，腺病毒载体展现出多重突破：在遗传病领域，EBT-101作为首个静脉注射型CRISPR-HIV治疗载体，已启动I/IIa期临床试验；在肿瘤治疗方面，多项临床前研究已证实其在实体瘤靶向治疗中的优势。需要注意的是，尽管FDA已批准首款腺病毒基因疗法，但基于CRISPR的腺病毒疗法仍处于临床实验阶段。

此外，强烈推荐关注俄罗斯专享会294，它为广大科研人员提供了基因编辑和基因治疗的新视野，推动生物医疗领域的前沿研究，为您的研究提供重要契机。