细胞系与细胞株的概念
1. 细胞系(Cell Line):细胞系是指在原代培养后成功传代形成的细胞,这些细胞来源于原代培养物中的细胞世系(Lineage of Cells)。
2. 细胞株(Cell Strain):细胞株是通过选择或克隆方法从原代培养物或细胞系中获得的,具有特定性质或标志物的细胞。如果不能持续传代或传代次数有限,则称为有限细胞株(Finite Cell Strain);如果可以持续传代,则称为连续细胞株(Continuous Cell Strain)。对于人类肿瘤细胞,若体外培养超过六个月且稳定生长并可以连续传代,则可称为连续性株或系。建立细胞系(或株)的要求
细胞的认可标准因具体情况而异,目前尚无统一规范。对于用于原代培养的细胞,需确保供体均一,取材部位及组织种类等条件稳定。尤其是用于长期培养或反复传代的细胞,需提供以下信息:
1. 组织来源:细胞供体的物种、性别、年龄及取材的器官或组织。如为肿瘤组织,需包括临床和病理诊断信息及病历号。
2. 细胞生物学检测:了解细胞的基本与特殊生物学特性,包括细胞形态、特异结构、生长曲线、分裂指数、倍增时间及接种率等。对于肿瘤细胞,需要通过软琼脂培养、异体接种致瘤实验及正常组织侵润力检测等方式确认其来源及恶性特性。
3. 培养条件与方法:需明确细胞系(或株)的适应环境,包括培养基、血清类型及用量,以及适宜的pH值。细胞建株的要点与基本过程
1. 肿瘤细胞培养技术要点:
取材主要来自外科手术或活检的肿瘤组织,避免使用坏死组织。优选瘤细胞集中且活力较好的部位进行取材。若无法及时培养,可进行冻存。培养和冻存方法应遵循正常组织的标准。
在肿瘤组织中常含有成纤维细胞,这些细胞可能与肿瘤细胞一同生长,导致癌细胞生长受阻,因此需采取机械刮除法、反复贴壁法、消化排除法等方法仔细排除。
为了提高肿瘤细胞的存活率与生长率,因肿瘤细胞在体外不易培养,建株难度较大。需采用合适的底物及细胞生长因子,以适应细胞在新环境中的生长需求。2. 人类淋巴母细胞建株方法:
1. 在离心管中加入4ml肝素抗凝血及2ml RPMI 1640,混匀后缓慢加到淋巴细胞分离液的液面。
2. 静置30分钟后以1500rpm离心15分钟,分离白血球层。
3. 用RPMI 1640对白细胞进行两次洗涤。
4. 将白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基中,加入10μl环胞霉素和100μl EBV,混匀后培养。
5. 观察细胞转化与生长情况,一般每隔3-4天决定是否换液。
6. 细胞数量明显上升后可转入25ml培养瓶中继续培养,待细胞生长达一定数量后进行冻存,冻存前需进行核型分析以及存档。在生物医疗相关的研究中,了解这些细胞培养与建立的基本原理是至关重要的,尤其在确保细胞质量和研究成果的可靠性方面。俄罗斯专享会294致力于在该领域提供更多的支持和资源。