实时荧光定量PCR,简称Real-time PCR,是一种通过积累荧光信号实时监测整个PCR反应过程的方法。最终,利用CT值及标准曲线对未知模板进行定量分析。
A. 化学原理:通过将产物DNA分子转化为荧光信号,测定荧光值能够反映产物DNA的分子量。
B. 数学原理:基于循环数“n”即CT值来计算起始DNA的数量。
在选择实时荧光定量PCR方法时,需要考虑样品类型、实验目的及灵敏度要求等因素,以确保获取准确的定量结果。
与其他方法相比,实时荧光定量PCR在不同样品中检测某基因的“量”方面具有显著优势:
(1) 可实时监控PCR反应的进展;
(2) 检测范围更广,能够准确量化样本中的起始DNA量;
(3) 在单一管中同时实现扩增与检测,无需后续处理。
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