左旋咪唑是一种合成的驱虫药,广泛用于兽医学领域,主要用于治疗由线虫引发的寄生虫感染。此药物通过靶向线虫的乙酰胆碱离子通道受体发挥其驱虫效果(Martin等)。除了医学应用,左旋咪唑在多个研究领域中价值颇高,尤其是在秀丽隐杆线虫的麻痹实验中。它能够有效诱导这些线虫的瘫痪,因此在研究神经元功能和肌肉生理学方面具有重要意义。通过以下实例,研究人员可以深入了解毒理学实验,并利用此框架开展不同药物的毒性研究。
材料准备包括:带盖的6孔板、NGM培养基、M9缓冲液、100mM的左旋咪唑原液、同步成虫种群以及WMicrotrackerArena设备。简易操作流程如下:
1. 微孔板制备: 按照标准程序制备NGM培育基。
2. 在加入盐和胆固醇后,立即将左旋咪唑加入到55°C的NGM琼脂溶液中。
3. 左旋咪唑片未接种OP50菌株,制备后在两周内可使用,并需保存在4°C的容器中。
4. 测定是在实验开始前已将模板降至室温的板上进行的。
实验步骤如下:
- 在NGM培养皿中培养同步的成虫种群(OP50);
- 用M9缓冲液将蠕虫从培养皿中取出,并转移到无菌15毫升试管中;
- 让虫子静置,倒掉上清液,注意不要扰乱底部颗粒;
- 用5ml M9缓冲液进行清洗,短暂摇动或翻转试管;
- 重复上述清洗步骤,倒出上清,加入3ml M9缓冲液;
- 计数每10μl的虫子数,计算平均值;
- 准备悬浮液,得到[35虫/10μl];
- 将10μl虫液转移至6孔板;
- 使用wMicroTrackerARENA设备观察蠕虫活动。
注意:至少进行三次技术重复,并至少进行两次生物重复。
实验结果显示,左旋咪唑对N2的运动活性呈现出明显的剂量依赖性抑制反应曲线,比较了不同浓度的左旋咪唑(0µM(对照)、100µM和200µM)的治疗效果。在6孔板中,每孔选取35个年轻成虫N2,在23℃下记录其运动活动为期4小时。数据代表四个独立实验的平均值,并进行重复检测。
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